南北五味子中五味子酯甲含量的测定论文
【摘要】 目的：建立南、北五味子中五味子酯甲的测定方法并比较其在南、北五味子中含量的差异。方法：采用超声提取法提取南、北五味子中五味子酯甲，利用紫外可见分光光度法测定五味子酯甲的含量。结果：五味子酯甲在220nm处有最大吸收，其在0.15～0.65mg·mL-1(r=0.999 6)范围内线性关系良好;南五味子中五味子酯甲平均回收率为96.54%，RSD为1.67%(n=5);北五味子中五味子酯甲平均回收率为97.77%，RSD为2.87%(n=5)。结论：该方法用于测定五味子药材中五味子酯甲的含量具有简单快捷，重复性好的优点，可用于五味子药材中五味子酯甲的质量控制。
【关键词】 南五味子;北五味子;五味子酯甲;分光光度法/紫外线
【ABSTRACT】 Objective：To investigate a method for determination of schisantherin A in Schisandra chinensis(Turcx.)Baill and Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils,and compare the difference in contents.Methods：The schisantherin A was extracted by ultrasonic extraction method,then uv瞯is spectrophotometry was applied.Results：Schisantherin A was absorbed maximally at 222 nm wavelength,and showed a good linear relationship at the range of 0.15～0.65mg·mL-1(r=0.999 6).The average recorery of schisantherin A in Sichasndra sphenanthera Rehd.et Wils was 96.54%，RSD was 1.67%(n=5).The average recorery of schisantherin A in Schisandra chinensis(Turcx. )Baill was 97.77%，RSD was 2.87%(n=5).Conclusion：The method is simple，rapid,reproducible，and suitable for the quality control of Schisandra chinensis Fruit.
【KEY WORDS】 Schisandra sphenantherac Rehd.et Wils,Schisandera chinensis(Turcx)Baill,Schisantherin A,Spectrophotometry/Ultraviolet
五味子系木兰科植物五味子[Schisandera chinensis(Turcx.)Baill.]或华中五味子[Schisandra sphenantherac Rehd.et Wils]的干燥成熟果实，是常用的滋补型中药，因其果肉甘、酸、辛、苦、咸五味俱全,故名五味子，传统认为北五味子的品质要好于南五味子，《本草纲目》上有“五味，今有南北之分，南产者色红,北产者色黑。入滋补药，必用北产者良”的记载，所以临床用药多为北五味子，也称辽五味子;华中五味子又称为“南五味子”。2005年颁布的《中国药典》将北五味子和南五味子分别收载为两个品种。五味子是一种多用途、价值极高、药食兼用型经济植物，其有效成分主要为木脂素类如：五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲、五味子醇甲等，挥发油类如：α蒎烯、β蒎烯、月桂烯、柠檬烯、金合欢烯和乙酸龙脑酯等[1]，药理研究表明五味子具有敛肺、涩精、止汗、止泻、生津、益智、安神之功效，主要用于治疗肺虚咳嗽、盗汗、痢疾、神经衰弱、急慢性肝炎、视力衰退等症[2]，其中五味子酯甲对化学毒物引起的动物肝细胞损伤有明显保护作用，可抑制转氨酶的释放，使丙氨酸氨基转移酶活性降低[3]。但是南、北五味子植物学形态十分相似，市场使用非常混乱，以南五味子冒充北五味子的现象十分普遍。本实验利用超声提取方法对南、北五味子药材的有效成分之一五味子酯甲进行提取，对其含量进行分析测定，考察其在南、北五味子中的差异，为南、北五味子的鉴别及临床合理应用提供实验依据和科学参考。
1 材料与方法
2010年2月谭晓虹等：南、北五味子中五味子酯甲含量的测定第1期2010年2月河北北方学院学报(医学版)第1期1.1 仪器与试剂
756MC型紫外部杉分光光度计(上海精密科学仪器厂)。
HS3120型超声波仪(宁波江南仪器厂)。
TG328A型分析天平(上海天平仪器厂)。
GOA型电热真空干燥箱(天津东郊机械加工厂)。
五味子酯甲对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号：071105)，南五味子和北五味子均购于张家口市药材公司，经鉴定为辽宁产北五味子和四川产南五味子，甲醇为分析纯(天津市化学试剂三厂)，实验用水为三重蒸馏水。
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备
精密称取五味子酯甲对照品0.010 0g，用甲醇溶解并定容至10mL，摇匀，得1.0mg·mL-1的储备液，即为五味子酯甲对照品溶液。
1.2.2 供试品溶液的制备
将同一批次的`南五味子和北五味子用蒸馏水快速漂洗三次后，置70℃的干燥箱中干燥，然后研磨成粉末状。用分析天平准确称取样品粉末0.500 0g五份于25mL比色管中加入甲醇，采用超声提取，并对文献中的提取方法进行了改进，先浸泡放置30min后于45℃超声提取30min，常压过滤，在滤渣中加入甲醇25mL，再于45℃进行超声提取30min，常压过滤，合并两次滤液定容至50mL作为供试品溶液[4]。
1.2.3 测定波长的选择
将对照品储备液稀释成浓度为0.010 0 mg·mL-1溶液，在波长0～600nm范围内进行扫描，确定五味子酯甲的的最大吸收波长λmax=222nm。
1.2.4 线性关系的考察
将对照品贮备液用甲醇稀释成下列浓度：0.150、0.250、0.350、0.450、0.550和0.650mg·mL-1，以甲醇做空白，于λmax=222nm波长下分别测定上述标准系列溶液的吸光度，以质量浓度x(mg·mL-1)为横坐标，以吸光度为纵坐标进行回归计算，得到五味子酯甲的标准曲线方程及相关系数r。
1.2.5 精密度试验
取0.100mg·mL-1对照品溶液，于222nm波长下重复测定5次，记录吸光度值。
1.2.6 重复性试验
精密称取同一批次南、北五味子药材粉末各5份，按方法“1.2.2”项下制备供试品溶液，并于222nm波长下进行分析测定。
1.2.7 稳定性试验
精密称取同一批次南、北五味子药材粉末，按方法“1.2.2”项下制备供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、10、14、24h测定，考察稳定性。
1.2.8 回收率试验
取已知五味子酯甲准确含量的南、北五味子样品5份，分别精密加入一定量的五味子酯甲对照品，按方法“1.2.2”项下制备供试品溶液，测定其吸光度并求得含量，计算回收率。
1.2.9 样品的测定
取上述南、北五味子供试品溶液各5份，测定其吸光度值并用标准曲线方程求出样品中五味子酯甲的含量。
2 结果
2.1 线性关系的考察 以质量浓度x(mg·mL-1)为横坐标，以吸光度为纵坐标进行回归分析，得到五味子酯甲的标准曲线方程Y=0.889 4x-0.008 3(r=0.999 6)，结果表明五味子酯甲浓度在0.15～0.65mg·mL-1范围内呈现良好的线性关系。
2.2 精密度试验
重复测定5次对照品溶液所得吸光度值的RSD为0.540%,表明仪器精密度良好。
2.3 重复性试验
重复性实验中，同一批次5份样品测定，结果表明南五味子中五味子酯甲RSD为2.01%。北五味子中五味子酯甲RSD为2.50%，表明该方法重复性良好。
2.4 稳定性试验
取供试品溶液,每隔一定时间测定一次，五味子酯表1 南五味子中五味子酯甲的回收率试验表2 北五味子中五味子酯甲的回收率试验表3 南、北五味子中五味子酯甲的含量(mg·mL-1)甲含量在24h内基本保持不变，南五味子的RSD为3.59%，北五味子的RSD为3.91%(n=5)，表明供试品溶液中五味子酯甲在24h内测定基本稳定。
2.5 回收率试验
南五味子回收率试验结果见表1、北五味子回收率试验结果见表2。
2.6 样品含量
实验中所测本批次南、北五味子中五味子酯甲含量结果见表3。
3 讨论
3.1 超声提取因其具有强烈振动和空化效应，可以加速有效成分的溶出，提取温度要求较低，克服了传统有机溶剂提取中有效成分因高温质变的可能，使得有效物质活性不易被破坏，提取时间短，产率高，操作简单，已在天然产物提取方面得到了广泛的应用。本实验首先将样品浸泡一定时间再利用超声提取方法提取南、北五味子中五味子酯甲，此法较一般常用提取方法如萃取法、冷浸法、回流提取法等具有提取速度快，提取溶剂用量少且操作简便易行等优点，实验效果良好。
3.2 五味子酯甲结构如下：
在其结构中含有共轭体系，因此在紫外光区有特征吸收，所以利用紫外分光光度法进行分析，此方法灵敏度和准确度较高。本实验采用紫外分光光度法测定五味子酯甲的含量，得到了满意的结果，建立了一种准确、简便、快速的测定南、北五味子中五味子酯甲含量的紫外分光光度法，适用于五味子药材中五味子酯甲的含量测定及药品的质量监控。
3.3 本研究表明，南、北五味子中均含有五味子酯甲成分，并且五味子酯甲含量南五味子略高于北五味子，而其他相关报道[5]五味子有效成分中的木脂素类多为北五味子高于南五味子，这可能与五味子的产地、采收季节等诸多因素有关。本实验结果为南五味子药效的重新认识以及扩大其应用范围提供了实验基础，同时也为南五味子的开发、利用提供了实验参考，可在一定程度上缓解经济发展和生态环境变迁导致的北五味子的蕴藏量大幅度下降和需求量不断增长的矛盾。
【参考文献】
1 沈振铎，陈晓辉，熊丽，等.评价五味子和南五味子质量的GC指纹图谱的建立与分析[J].沈阳药科大学学报，2008，8(25)：650654.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005.
3 明延波，赵华，周丽，等.五味子的研究进展[J].实用药物与临床，2007,6(10)：365367.
4 赵艳玲，孔维军，山丽梅，等.HPLC法测定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量[J].中药新药与临床药理，2008,4(19)：299301.
5 张林疆，刘唯芬，毕开顺，等.五味子质量标准的研究[J].辽宁中医学院学报，2004,3(6)：219220.
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