鸡CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建
用Trizol提取4～6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA,再用Oligo-dT纤维素富集mRNA后,用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因cDNA.PCR产物切胶回收后连入T载体,序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD3γδ cDNA比白莱航鸡多一个氨基酸,且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异.将白莱航鸡的CD3γδ从T载体上切下连入pcDNA3.1(+),再将重组质粒pcDNA3.1-CD3转染COS-7细胞,用已知的抗鸡CD3的单克隆抗体测得转染细胞中CD3γδ分子的表达,这说明构建的真核表达质粒正确,为下一步用DNA免疫的手段研制抗鸡CD3的单克隆抗体以及研究鸡CD3分子的结构和功能打下了基础.
作 者： 胡青海 焦新安 徐耀辉 张小燕 潘志明 黄金林 殷月兰 HU Qing-hai JIAO Xin-an XU Yao-hui ZHANG Xiao-yan PAN Zhi-ming HUANG Jin-lin YIN Yue-lan 作者单位： 扬州大学,江苏,扬州,225009 刊 名： 中国预防兽医学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 2006 28(2) 分类号： Q785 关键词： 鸡 CD3 cDNA 真核表达