嗜热酯酶APE1547催化活性的定向进化研究

嗜热酯酶APE1547催化活性的定向进化研究

对来源于嗜热古菌Aeropyrum pernix的酯酶(APE1547)催化活性进行定向进化研究.利用APE1547特殊的稳定性,建立了准确的高通量高温酯酶筛选方法.对第一代随机突变库筛选获得了催化活性较野生型提高1.5倍的突变体M010,序列分析表明其氨基酸突变为R526S.从第二代突变库中筛选出的总活力提高5.8倍突变体M020,突变位点为R526S/E88G/A200T/I519L,其比活力与M010一致,但表达量比野生型提高约4倍.对M020酶学 性质表征发现,其最适pH为8.5,比野生型向碱性偏移0.5;活性中心残基酸性基团的解离常数(pK1)由野生型的7.0提高至7.5.晶体结构分析表明,突变位点R526距离活性中心较近,将其突变为Ser降低了活性中心的极性,抑制了催化残基His的解离,使酸性基团的解离常数升高.

作 者： 王秋岩 杨广宇 刘艳莉 王艳平 冯雁 WANG Qiu-yan YANG Guang-yu LIU Yan-li WANG Yan-ping FENG Yan   作者单位： 吉林大学,分子酶学工程教育部重点实验室,长春,130023  刊 名： 微生物学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(2)  分类号： Q93  关键词： 定向进化   嗜热酶   酯酶活力   解离常数