小鼠AMCase基因突变体的cDNA克隆及序列分析
目的克隆小鼠酸性哺乳动物几丁质酶(AMCase),并进行序列分析.方法从BALB/c小鼠胃组织中提取总RNA,逆转录成cDNA,运用PCR技术体外扩增获得AMCase基因,构建pMD18-T/AMCase重组载体,测序后应用DNAMAN 4.0软件与标准序列进行比较,并通过SignalP 3.0和TMHMM Server v.2.0等服务器对等电点、氨基酸组成、信号肽和跨膜结构等特征进行分析.结果所克隆基因共编码473个氨基酸,分子量为51.93kD,等电点为4.73,与AMCase同源性达99.57%,同属18家族的几丁质酶成员,由信号肽(氨基酸1～21)、催化区(氨基酸22～391)、铰链区(氨基酸392～425)和结合区(氨基酸426～473)组成.编码的蛋白质在催化区和铰链区分别发生了突变,292位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),404位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸).结论所克隆的基因为AMCase的一个突变体,其相关生物学信息的明确,为今后运用分子生物学技术进一步深入研究其作用奠定了基础.
作 者： 陈凌 沈柱 刘玉峰 刘斌 刘瑛 作者单位： 710032,西安,第四军医大学西京医院皮肤科 刊 名： 解放军医学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 2006 31(3) 分类号： Q781 关键词： 酸性哺乳动物几丁质酶 突变体 序列分析,DNA