HSF1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞的永生化
目的:建立HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为HSF1的功能研究提供实验模型.方法:用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测两种细胞株中目的基因的整合,用RT-PCR法鉴定SV40 T基因在转染细胞中的表达;用Western blot检测所建细胞株的诱导型热休克蛋白70的表达情况.结果:有3个细胞克隆已扩大培养稳定传代达6个月,经鉴定SV40 T抗原已整合到两种细胞中且稳定表达, HSF1-/-胚胎成纤维细胞热休克蛋白70的诱导表达消失.结论:成功建立永生化HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞.
作 者： 刘梅冬 张华莉 龚环宇 陈广文 王慷慨 鄂顺梅 肖献忠 LIU Mei-dong ZHANG Hua-li GONG Huan-yu CHEN Guang-wen WANG Kang-kai E Shun-mei XIAO Xian-zhong 作者单位： 刘梅冬,张华莉,陈广文,王慷慨,鄂顺梅,肖献忠,LIU Mei-dong,ZHANG Hua-li,CHEN Guang-wen,WANG Kang-kai,E Shun-mei,XIAO Xian-zhong(中南大学,湘雅医学院病理生理学教研室,长沙,410078)龚环宇,GONG Huan-yu(中南大学,湘雅三医院,长沙,410013)
刊 名： 中南大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 31(2) 分类号： Q813.2 关键词： HSF1 基因敲除 胚胎成纤维细胞 永生化 SV40T抗原