克隆猪主要组织相容性复合体Ⅱ类DR基因座α链和β链及其体外复合体的构建
为推动猪主要组织相容性复合体(MHC)空间构象的研究,体外构建了猪的MHC-Ⅱ类蛋白复合体(SLA-Ⅱ).首先克隆长白-达兰杂交商品猪DRA和DRB基因,用富含甘氨酸-丝氨酸的Linker(G4S)3连接DRA和DRB的胞外区,用SOE-PCR得到复合体基因DRA-linker-DRB,插入原核表达载体进行表达;对表达的融合蛋白进行Western-blot鉴定、纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化.对分离的目的蛋白、融合蛋白及麦芽糖结合蛋白(MBP)进行二级结构测定.得到83.4 ku的可溶性融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DRB,其Western杂交带与表达条带大小一致.切割分离后的目的蛋白大小为40.9 ku.目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB二级图谱显示该蛋白呈典型a-螺旋结构,各二级结构元件α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲的氨基酸数目分别为80、121、101和80,融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DR与目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB的二级结构各元件的符合率分别达到了95%、96.7%、91.1%和93.0%.结果分析表明得到的复合体构象正确,可用于进一步的B细胞抗原表位的筛选等结构和功能研究.
作 者： 高凤山 王磊 李新生 李云岗 王慧飞 方勤美 郝慧芳 夏春 Gao Fengshan Wang Lei Li Xinsheng Li Yungang Wang Huifei Fang Qinmei Hao Huifang Xia Chun 作者单位： 高凤山,Gao Fengshan(中国农业大学,动物医学院,北京,100094;大连大学,生物工程学院,辽宁,大连,116622)王磊,李新生,李云岗,方勤美,郝慧芳,夏春,Wang Lei,Li Xinsheng,Li Yungang,Fang Qinmei,Hao Huifang,Xia Chun(中国农业大学,动物医学院,北京,100094)
王慧飞,Wang Huifei(中国人民武装警察部队学院,消防工程系,河北,廊坊,065000)
刊 名： 中国农业大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2006 11(3) 分类号： Q518.1 S858.28 关键词： 猪 主要组织相容性复合体 基因座 二级结构