转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究

转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究

目的: 构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响.方法: TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72 h后,经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株;利用微孔隔离小室检测转人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下的迁移能力.结果: 构建含CXCR4基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的L929转基因细胞,转入人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下介导迁移.结论: 成功构建转染人CXCR4细胞株,为肿瘤迁移模型的研究和鼠抗人CXCR4 mAb的制备打下基础.

作 者： 周时勇 杨明峰 王雪峰 于葛华 成中芹 张学光 ZHOU Shi-yong YANG Ming-feng WANG Xue-feng YU Ge-hua CHENG Zhong-qin ZHANG Xue-guang   作者单位： 苏州大学医学生物技术研究所,江苏省干细胞研究重点实验室,江苏,苏州,215007  刊 名： 细胞与分子免疫学杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分类号： Q785  关键词： CXCR4   逆转录病毒   稳定表达   迁移