应用载体介导的RNAi技术抑制胰腺癌细胞K-RASAsn12的表达
为了研究载体介导的RNAi(RNA interference)技术特异地抑制K-RASAsn12(K-RAS第12位密码子突变形式为GAT)在胰腺癌细胞中的表达,合成两条编码针对K-RASAsn12突变特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的单链DNA,并将其克隆到pSilenCircle载体中,构建含目的基因片段的重组质粒pSC-K-RASAsn12.同法构建含GFP基因片断的重组质粒pSC-GFP做为对照.用其分别瞬时转染人胰腺癌AsPC-1细胞和BxPC-3细胞后,经半定量RT-PCR和Western blot检测K-RAS的表达水平.结果表明构建的针对K-RASAsn12的编码突变特异性shRNA的质粒表达载体可特异的抑制胰腺癌细胞的K-RASAsn12表达,但对野生型的K-RAS(K-RASWT)表达无影响.
作 者： 孟繁杰 付泽娴 张峰 李保东 谢绍建 蔡建辉 MENG Fan-jie FU Ze-xian ZHANG Feng LI Bao-dong XIE Shao-jian CAI Jian-hui 作者单位： 河北医科大学第二医院外科外科研究中心,石家庄,050000 刊 名： 中国生物工程杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 26(4) 分类号： Q752 关键词： 胰腺癌K-RAS RNAi 短发夹RNA