抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达
目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达.方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VH-Linker-VL,并在VH基因5'端和VL基因3'端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后, SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确.SDS-PAGE和Western blot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27 000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合.结论成功地实现了抗SLT2A scFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础.
作 者： 毛旭虎 马颖 陈洪章 邹全明 MAO Xu-hu MA Ying CHEN Hong-zhang ZOU Quan-ming 作者单位： 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038 刊 名： 免疫学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： IMMUNOLOGICAL JOURNAL 年，卷(期)： 2006 22(4) 分类号： Q78 关键词： 志贺样毒素 单链抗体 分泌表达