体外重折叠核糖核酸酶A及其荧光结构表征
核糖核酸酶A(RNase A)作为蛋白质体外重折叠研究的模型蛋白,考察了稀释复性过程中脲浓度、稀释倍数、氧化还原环境(GSH浓度和GSH/GSSG比例)、pH值、温度以及聚集抑制剂的添加对该酶活性回收率的影响.在变性蛋白浓度为100 μg·mL-1,复性液含有2 mol·L-1脲,GSH浓度2 mmol·L-1,GSH/GSSG比为4:1,pH8.0,并添加终浓0.1%的PEG,转速为150 r·min-1,温度37℃的条件下复性,RNase A的活力回收率可达70%以上.利用荧光分析法对RNase A复性过程的结构变化进行了表征,在此基础上对RNase A体外重折叠过程蛋白质分子的构象变化以及活性中心的形成过程进行了阐述.
作 者： 谭培生 罗曼 盛清 关怡新 姚善泾 TAN Pei-sheng LUO Man SHENG Qing GUAN Yi-xin YAO Shan-jing 作者单位： 谭培生,罗曼,关怡新,姚善泾,TAN Pei-sheng,LUO Man,GUAN Yi-xin,YAO Shan-jing(浙江大学,化学工程与生物工程学系,浙江,杭州,310027)盛清,SHENG Qing(浙江理工大学,生命科学学院,浙江,杭州,310018)
刊 名： 浙江大学学报（农业与生命科学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 32(5) 分类号： Q518.4 关键词： 核糖核酸酶A 稀释复性 荧光分析法 分子结构