嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质
乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶.根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH) 的序列设计引物,从T. ethanolicus JW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109 (DE3)中表达.表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯.带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇. 带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70 ℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55 ℃; 最适pH 8.9,最适为T 60 ℃.以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5 μmol/(min·mg).T. ethanolicus JW200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路.
作 者： 蒋宇 邵蔚蓝 JIANG Yu SHAO Wei-lan 作者单位： 蒋宇,JIANG Yu(江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,210046)邵蔚蓝,SHAO Wei-lan(江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,210046;南京师范大学,生命科学学院,江苏,南京,210097)
刊 名： 食品与生物技术学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 25(5) 分类号： Q814 关键词： 嗜热厌氧乙醇菌 双活性 乙醛脱氢酶 乙醇脱氢酶