脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化
目的 在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质.方法 PCR扩增Hlrg Cdna编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导.表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化.结果 经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%.表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯.加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞.结论 在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础.
作 者： 杜可军 常文辉 侯立朝 骆文静 刘承利 陈苏民 陈景元 柴玉波 DU Ke-jun CHANG Wen-hui HOU Li-chao LUO Wen-jing LIU Cheng-li CHEN Su-min CHEN Jing-yuan CHAI Yu-bo 作者单位： 杜可军,骆文静,陈景元,DU Ke-jun,LUO Wen-jing,CHEN Jing-yuan(第四军医大学劳动与环境卫生学教研室,陕西,西安,710032)常文辉,CHANG Wen-hui(陕西省疾控中心)
侯立朝,HOU Li-chao(第四军医大学西京医院,麻醉科)
刘承利,陈苏民,柴玉波,LIU Cheng-li,CHEN Su-min,CHAI Yu-bo(第四军医大学生物化学与分子生物学教研室)
刊 名： 毒理学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF TOXICOLOGY 年，卷(期)： 2006 20(5) 分类号： Q271 关键词： 脂多糖应激新分子 蛋白融合表达 克隆 纯化