扩增引进限制性酶切位点技术检测CYP2C9基因的多态性
建立了一种简便、快速、准确的检测CYP2C9基因Arg144Cys位点和Ile359Leu位点多态性的新方法.该方法采用与模板具有1个碱基错配的引物通过PCR在扩增产物中引进限制性酶切位点,即扩增引进限制性酶切位点(amplification-created restriction sites,ACRS),其中通过上游引物在扩增Arg144Cys位点的片断中引入AvaⅡ切点,使得野生型基因CYP2C9 * 1和突变型基因CYP2C9*2的PCR产物中分别含有2个和1个AvaⅡ切点;通过下游引物在扩增Ile359Leu位点的片断中引入Mva Ⅰ切点,使得野生型基因CYP2C9*1和突变型基因CYP2C9*3的PCR产物中分别含有1个和2个Mva Ⅰ切点.将来自Arg144Cys位点和Ile359Leu位点的PCR产物各取一份测序,表明错配碱基成功引入PCR产物中.将包含Arg144Cys位点的PCR产物用AvaⅡ消化,将包含Ile359Leu位点的PCR产物用Mva Ⅰ消化,然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染进行基因分型.由于野生型基因和突变型基因的PCR产物中都至少含有1个酶切位点,能完全避免因限制性核酸内切酶失活或酶切不完全而导致的基因分型错误.
作 者： 何震宇 杨红 李月琴 周天鸿 HE Zhen-yu YANG Hong LI Yue-qin ZHOU Tian-Hong 作者单位： 何震宇,HE Zhen-yu(暨南大学生物工程学系,广东,广州,510632;广东药学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510006)杨红,YANG Hong(广东药学院生物化学与分子生物学教研室,广东,广州,510006)
李月琴,周天鸿,LI Yue-qin,ZHOU Tian-Hong(暨南大学生物工程学系,广东,广州,510632)
刊 名： 暨南大学学报（自然科学与医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION） 年，卷(期)： 2006 27(5) 分类号： Q356 关键词： CYP2C9基因 多态性 聚合酶链反应 扩增引进限制性酶切位点