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α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达

时间:2021-12-08 08:55:33 生物医学论文 我要投稿

α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达

根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列推导出其DNA序列,设计并人工合成两两互补的14条寡核苷酸片段.经片段延伸、PCR、克隆,成功构建α-银环蛇毒素基因克隆质粒;质粒经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切回收后连接于表达载体pET28a(+)中,分别转化BL21(DE3)、BL21(DE3)Codon plus、BL21(DE3)plysS进行诱导表达,表达产物经Tris/tricine系统进行SDS-PAGE分析.结果表明:该基因已在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行了非融合表达,其表达量占细菌总蛋白的11.98%,主要以包涵体形式存在;同时对表达条件进行了优化,其表达量可达16.28%.经Western blot分析,在大约8 kDa处出现明显的目的带,与预计蛋白分子量大小一致,说明表达产物与天然α-银环蛇毒素具有相似的免疫原性.表达产物纯化、复性后经动物毒性试验表明:表达的α-银环蛇毒素蛋白具有生物学活性,小鼠腹腔注射其LD50约为1.28 μg/g.

作 者: 胡延春 张乃生 邓俊良 左之才 廖玉辉 欧阳红生 HU Yan-Chun ZHANG Nai-Sheng DENG Jun-Liang ZUO Zhi-Cai LIAO Yu-Hui OUYANG Hong-Sheng   作者单位: 胡延春,邓俊良,左之才,廖玉辉,HU Yan-Chun,DENG Jun-Liang,ZUO Zhi-Cai,LIAO Yu-Hui(四川农业大学动物科技学院,雅安,625014)

张乃生,欧阳红生,ZHANG Nai-Sheng,OUYANG Hong-Sheng(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062) 

刊 名: 遗传  ISTIC PKU 英文刊名: HEREDITAS(BEIJING)  年,卷(期): 2006 28(4)  分类号: Q78 S852  关键词: α-银环蛇毒素   基因克隆   非融合原核表达   免疫原性   生物学活性