肺炎衣原体重组的RNase HⅡa的克隆和性质鉴定

肺炎衣原体重组的RNase HⅡa的克隆和性质鉴定

目的对肺炎衣原体AR39的RNase HⅡa(CpRNase HⅡa)进行克隆、表达和性质鉴定.方法按已知的CpRNase HⅡa基因设计引物、扩增.用pET表达系统(表达载体、大肠杆菌BL21和Ni-NTA树脂)构建重组质粒,表达和纯化CpRNase HⅡa.5'-32P标记底物RNA/DNA,鉴定酶学性质.结果CpRNase HⅡa能切割RNA/DNA杂合体的寡聚核糖核苷酸链,产生3'羟基和5'磷酸基团的末端.CpRNase HⅡa对Mg2+和Mn2+表现出明显的离子偏好性,且反应最适pH值为9～10.CpRNase HⅡa切割12个碱基对的RNA/DNA杂合体底物的多个位点,但主要切割位点位于c10-g11之间与u7-g8之间.结论CpRNase HⅡa可以有效的降解RNA/DNA杂合体的RNA链,于肺炎衣原体内担负着一定的生物学功能.

作 者： 裴冬丽 PEI Dong-li   作者单位： 商丘师范学院,河南,商丘,476000;上海交通大学生命科学技术学院,上海,200030  刊 名： 上海交通大学学报（医学版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2006 26(5)  分类号： Q556  关键词： 肺炎衣原体   肺炎衣原体RNase HⅡa   表达   性质