肠道干细胞特异性表达基因Musashi-1启动子的克隆及功能分析
目的:克隆MSI-1基因的启动子,并进行功能鉴定.方法:通过PCR介导重组的方法,从小鼠基因组DNA中克隆MSI-1基因的5'侧翼片段.Northern Blotting检测MSI-1基因在体外细胞系的表达情况,选择转录分析的细胞平台.构建不同长度的5'末端缺失质粒,通过体外瞬时转染和荧光素酶活性测定,检测这些5'末端缺失质粒的相对转录活性.结果:Colon26细胞系和B16细胞系均存在MSI-1基因的表达,但Colon26量更多.MSI-1基因转录起始位点下游73 bp至上游4 939 bp的DNA序列的相对转录活性是pGL3-basic的29.9倍.结论:pMSI+73～-4 939具有驱动报告基因表达的活性,可以作为MSI-1基因的启动子.MSI-1基因转录起始位点上游4 011～4 939 bp之间存在调节MSI-1基因表达的顺式作用元件,可能与MSI-1基因的组织特异性表达有关.MSI-1基因启动子的克隆将为应用该启动子进行肠道干细胞的分离和纯化提供了条件.
作 者： 龚剑峰 朱维铭 高翔 李宁 黎介寿 GONG Jian-feng ZHU Wei-ming GAO Xiang LI Ning LI Jie-shou 作者单位： 龚剑峰,朱维铭,李宁,黎介寿,GONG Jian-feng,ZHU Wei-ming,LI Ning,LI Jie-shou(南京大学医学院临床学院(南京军区南京总医院)解放军普通外科研究所,江苏,南京,210002)高翔,GAO Xiang(南京大学模式动物研究所,江苏,南京,210093)
刊 名： 肠外与肠内营养 ISTIC PKU 英文刊名： PARENTERAL & ENTERAL NUTRITION 年，卷(期)： 2006 13(5) 分类号： Q344.13 关键词： 肠道干细胞 Musashi-1基因 启动子