人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的:扩增人lrp-cDNA全长编码区、并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出全长人lrp序列,将其克隆入原核表达载体pcTAT后转化大肠杆菌诱导表达,做SDS-PAGE分析;并用免疫印迹法鉴定6His-TAT-LRG融合蛋白表达.结果:测序结果表明,获得了全长人lrp-cDNA全长编码区,其序列与GenBank已经公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达量约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生阳性反应.结论:得到人lrp-cDNA全长编码区序列,并成功表达,为人lrp功能的深入研究奠定了基础.
作 者： 宋庆贺 柴玉波 陈苏民 陈南春 黄勇 代忠明 SONG Qing-He CHAI Yu-Bo CHEN Su-Min CHEN Nan-Chun HUANG Yong DAI Zhong-Ming 作者单位： 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033 刊 名： 第四军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2006 27(5) 分类号： Q78 关键词： 脂多糖 应答基因 逆转录聚合酶链反应 基因表达