染料亲和层析分离纯化酵母两种脱氢酶
目的 探讨三嗪活性染料Cibacron Blue F3GA和KE-3B艳红制备的亲和层析柱用于建立分离纯化面包酵母乙醇脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的方法.方法 在琼脂糖凝胶Sepharose 6B上,分别偶联三嗪活性染料Cibacron Blue F3GA和KE-3B艳红,制成染料亲和层析柱.将面包酵母经超声破碎、高速离心、硫酸铵分级沉淀、透析、冰冻干燥等步骤得到脱氢酶粗品,再经染料亲和层析柱进一步纯化.结果 经过固定有Cibacron Blue F3GA的亲和层析柱,乙醇脱氢酶的纯化倍数为2.0,酶活性回收率为30.8%;经过固定有KE-3B艳红的亲和层析柱,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的纯化倍数为23.2,酶活性回收率为66.0%.所得的乙醇脱氢酶在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为1条带.结论 染料配基亲和层析可作为面包酵母乙醇脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的精制纯化方法.
作 者： 陈翔 陈奇洲 欧国荣 马新华 李晓丽 CHEN Xiang CHEN Qi-zhou OU Guo-rong MA Xin-hua LI Xiao-li 作者单位： 军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津,300050 刊 名： 解放军预防医学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 2006 24(6) 分类号： Q550 关键词： 染料亲和层析 乙醇脱氢酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 分离纯化