5-杂氮胞苷对成人T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化水平的影响
目的:研究DNA低甲基化对穿孔素基因mRNA和蛋白表达的影响.方法:密度梯度离心分离正常成人的外周血淋巴细胞,磁珠分离CD4和CD8细胞后进行细胞培养,DNA甲基化抑制剂5-杂氮胞苷(5-azaC)处理.分别提取DNA、RNA和蛋白质.亚硫酸氢钠处理DNA,巢式PCR进行扩增、转化入大肠杆菌,挑取克隆测序.实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测穿孔素mRNA的表达,Western印迹检测穿孔素蛋白量的变化.结果:5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞穿孔素mRNA和蛋白表达显著高于未处理的CD4和CD8细胞组(P＜0.05).测序结果显示5-azaC处理后的CD4细胞和CD8细胞DNA穿孔素启动子区域的甲基化水平降低,与未处理的CD4和CD8细胞组比较差异有统计学意义(P＜0-05).结论:5-azaC处理后CD4和CD8细胞穿孔素mRNA的表达和蛋白的表达都有显著的增高,这种增高与CD4和CD8细胞穿孔素基因启动子区域出现的低甲基化有关.
作 者： 肖嵘 丁艳 陆前进 李亚萍 李勇坚 杨心洁 苏玉文 梁云生 张桂英 文海泉 XIAO Rong DING Yan LU Qian-jin LI Ya-ping LI Yong-jian YANG Xin-jie SU Yu-wen LIANG Yun-sheng ZHANG Gui-ying WEN Hai-quan 作者单位： 肖嵘,陆前进,李亚萍,李勇坚,苏玉文,梁云生,张桂英,文海泉,XIAO Rong,LU Qian-jin,LI Ya-ping,LI Yong-jian,SU Yu-wen,LIANG Yun-sheng,ZHANG Gui-ying,WEN Hai-quan(中南大学湘雅二医院皮肤科,长沙,410011;中南大学湘雅二医院表观遗传学研究中心,长沙,410011)丁艳,DING Yan(中南大学湘雅二医院皮肤科,长沙,410011;中南大学湘雅二医院表观遗传学研究中心,长沙,410011;海南省人民医院皮肤科,海口,570311)
杨心洁,YANG Xin-jie(中南大学湘雅二医院医学试验中心,长沙,410011)
刊 名： 中南大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 31(6) 分类号： Q78 关键词： 穿孔素 甲基化 亚硫酸氢钠测序 5-杂氮胞苷