核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达
不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序.该基因编码五功能的AROM蛋白.为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱氢奎尼酸合酶(DHQS)和EPSPS两结构域的DNA序列和只编码EPSPS结构域的DNA序列分别克隆入载体pGEX-4t-2和载体pET28b中,构建了4个表达载体pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E,并将其转入大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌JM109中表达.酶活测定和SDS-PAGE分析结果显示,上述编码序列在大肠杆菌细胞内获得了表达,含有表达载体pGEX-E、pET-DE和pET-E的大肠杆菌BL21(DE3)转化子具有EPSPS的催化活性,说明核盘菌arom基因的这些DNA片段可以被单独表达.核盘菌EPSPS异源表达系统的建立为该酶的抑制剂设计奠定了基础.
作 者: 于寒颖 杨谦 YU Han-ying YANG Qian 作者单位: 于寒颖,YU Han-ying(哈尔滨工业大学生命科学与工程系;大庆石油学院石油工程系)杨谦,YANG Qian(哈尔滨工业大学生命科学与工程系)
刊 名: 北京林业大学学报 ISTIC PKU 英文刊名: JOURNAL OF BEIJING FORESTRY UNIVERSITY 年,卷(期): 2006 28(6) 分类号: Q781 关键词: 基因表达 核盘菌 arom基因 大肠杆菌