植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达
根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9k-phyAm-4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子.经PCR鉴定表明,植酸酶基因已整合到酵母基因组中;表达产物的SDS-PAGE分析表明,酶蛋白分子大小为70.15kDa.Southern blotting结果表明,phyA基因整合到酵母染色体DNA中;转化子酶活测定结果表明,经密码子优化的重组酵母PP-NPm-4-2酶活可达136 900U/ml,比Arg没有优化的PP-NPm-8(47600U/ml)酶活高约2.8倍.
作 者： 许钦坤 王红宁 李洪淼 XU Qin-kun WANG Hong-ning LI Hong-miao 作者单位： 许钦坤,XU Qin-kun(四川农业大学动物科技学院,雅安,625014;韶关学院英东生物工程学院,韶关,512005)王红宁,李洪淼,WANG Hong-ning,LI Hong-miao(四川农业大学动物科技学院,雅安,625014)
刊 名： 中国生物工程杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 26(5) 分类号： Q94 关键词： 植酸酶 多点突变 毕赤酵母 高效表达