巢式-多重RT-Reahime PCR检测马铃薯黑环斑病毒的研究
马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)是马铃薯重要病毒病害之一.本研究根据PBRSV基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了两对巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Realtime PCR检测PBRSV的新方法.该方法采用E.Z.N.ATM珊试剂盒快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术.实验结果表明,该方法检测灵敏度可达450fg/μL植物总RNA.利用4对引物和1条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高.
