人心房肌KChIP2基因表达质粒pEGFP-KChIP2的构建和鉴定
目的:KChIP5作为瞬时外向钾通道(Ito)最重要的辅助亚基,在调控通道基因表达和电流特性中起重要作用.本实验拟构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为研究KChIP2对Ito的调控功能奠定基础.方法:①提取人心房肌总RNA,逆转录得到cDNA;②通过特异性引物进行PCK扩增得到KChIP2编码区全长序列,亚克隆到pMD18-T载体中,得到重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2;③再设计带有酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ的特异性引物,对重组克隆质粒pMD18-T-KChIP2进行PCK扩增,得到含有酶切位点的KChIP2编码区全长序列;④对含有酶切位点的KChIP2全长片段和pEGFP-c1进行HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切反应,然后进行电泳后胶回收,再进行连接和转化反应;⑤提取质粒,测序鉴定.结果:质粒测序结果与PubMed数据库KChIP2(AY026328)序列比对,同源性为99%.结论:成功构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为下一步转染实验研究KChIP2对瞬时外向钾通道的功能调控奠定了基础.
作 者： 谭晓秋 曾晓荣 白志茹 杨艳 刘智飞 陈桂兰 裴杰 作者单位： 泸州医学院心肌电生理学研究室,四川泸州,646000 刊 名： 泸州医学院学报 英文刊名： JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 2009 32(3) 分类号： Q424 关键词： 瞬时外向钾通道 心肌细胞 钾通道相关蛋白2 基因克隆