牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用
建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列,利用Primer Explorer V3软件设计了6条引物,并对LAMP反应温度和反应时间等条件进行了优化.该方法的检测限为30 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与鲤春血症病毒、传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、海洋双 RNA 病毒、病毒性出血败血症病毒以及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应.该方法检测时间短,在1 h内即可完成检测.用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明40尾石鲽鱼样品中有3尾感染HRV,与病毒分离结果一致,说明LAMP方法比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断.
作 者： 孙颖杰 岳志芹 刘荭 赵玉然 史秀杰 梁成珠 吴斌 李叶 王哲 SUN Ying-jie YUE Zhi-qin LIU Hong ZHAO Yu-ran SHI Xiu-jie LIANG Cheng-zhu WU Bin LI Ye WANG Zhe 作者单位： 孙颖杰,SUN Ying-jie(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062;辽宁出入境检验检疫局,大连,116001)岳志芹,赵玉然,梁成珠,YUE Zhi-qin,ZHAO Yu-ran,LIANG Cheng-zhu(山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,青岛,266002)
刘荭,史秀杰,LIU Hong,SHI Xiu-jie(深圳出入境检验检疫局,深圳,518001)
吴斌,李叶,WU Bin,LI Ye(辽宁出入境检验检疫局,大连,116001)
王哲,WANG Zhe(吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062)
刊 名： 华中农业大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2010 29(2) 分类号： Q937.47 关键词： 牙鲆弹状病毒 环介导等温扩增 聚合酶链式反应 检测 hirame rhabdovirus(HRV) loop-mediated isothermal amplification(LAMP) RT-PCR detection