改造地高辛标记DNA和检测试剂盒用于凝胶阻滞实验的新方法
凝胶阻滞实验(gel retardation),又称为电泳迁移率变动实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA),是研究蛋白和DNA相互作用的一种技术.传统的32P标记探针的凝胶阻滞实验,具有很高的灵敏度,然而也有接触危险性的放射性同位素且不容易定量分析的缺点.最近利用非放射性标记的凝胶阻滞实验,已有很多成功的报道,该方法快捷,安全,灵活,但非放射性标记探针的凝胶阻滞试剂盒的费用却很高.在论文中,我们提供了一种改造地高辛标记DNA和检测试剂盒用于凝胶阻滞实验的新方法.首先将双链DNA探针末端引入EcoRⅠ粘性末端以便进行3′末端标记,然后利用价格比较便宜的地高辛标记DNA和检测试剂盒(DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ, Rohe) 进行探针标记和凝胶阻滞信号检测.经过多次实验参数的摸索,最终得到了成功的结果,为利用地高辛标记DNA和检测试剂盒进行凝胶阻滞实验提供了成功的例子和方法.
作 者： 祁小廷 柴小清 刘靖 柴团耀 QI Xiao-Ting CHAI Xiao-Qing LIU Jing CHAI Tuan-Yao 作者单位： 祁小廷,QI Xiao-Ting(中国科学院研究生院生物系,北京,100049;首都师范大学生命科学学院,北京,100037)柴小清,刘靖,CHAI Xiao-Qing,LIU Jing(首都师范大学生命科学学院,北京,100037)
柴团耀,CHAI Tuan-Yao(中国科学院研究生院生物系,北京,100049)
刊 名： 遗传 ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING) 年，卷(期)： 2006 28(6) 分类号： Q3 关键词： 凝胶阻滞实验 地高辛 探针