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含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内

时间：2021-12-07 15:40:20 生物医学论文我要投稿

含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究

目的:构建、表达和纯化带有转膜结构域Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,并对纯化产物的亲和'活性和内化作用进行研究.方法:将Arg9的编码序列分别重组到ScFv14/EGFP基因的5'端、3'端和二者之间,将它们分别克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS进行诱导表达和纯化,用间接ELISA方法检测表达产物与HBsAg的亲和活性,并用间接免疫荧光检测纯化蛋白的内化活性.结果:经测序及酶切鉴定证实4种融合基因序列完全正确;SDS-PAGE和Western blot证实4种融合基因成功表达和纯化;间接ELISA检测证实4种融合蛋白均具有HBsAg结合活性,间接免疫荧光检测显示N端带有Arg9的融合蛋白有较强的内化作用,而且不内化进入HBsAg非表达的细胞.结论:成功构建、表达和纯化了ScFv14/EGFP融合蛋白和3种带有Arg9的ScFv14/EGFP融合蛋白,纯化产物均具有抗原HBsAg亲和活性,N端带有Arg9的融合蛋白与靶细胞作用有较强的内化作用.

含Arg9的人抗HBsAg单链抗体/EGFP融合蛋白基因的构建、表达和内化作用的研究

作者：作者单位：刊名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 26(7) 分类号： Q786 关键词：乙型肝炎 HBsAg 单链抗体 Arg9

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