彩超在小鼠原位肝癌移植模型中的应用研究
摘要：
目的：
研究应用彩超评价小鼠原位肝癌移植造模成功的可行性。方法：建立小鼠肝癌原位移植模型， 应用彩超方法观察(3、5、9、16d)不同造模时间小鼠肝癌原位移植造模情况，同时与解剖观察肿瘤比较；并取 其肿瘤作病理组织学检查。结果：彩超在模型建立中后期9d组肿瘤的检测结果与解剖观察情况相近，肿瘤检出率 可达90％。结论：彩超检测方法是一种无创诊断，可用于小鼠原位肝癌模型的实时评价，为建立小鼠原位移植肝癌 模型的判定提供科学依据.毕业论文www.unjs.com
关键词：彩超；小鼠原位肝癌；模型
目前，肝癌治疗措施强调实行综合治疗，即通过 西医、中医及其他有效的手段和方法相结合的综合 治疗。中医药在防治肝癌发生，减少复发，减轻放、 化疗的毒副作用，提高生存质量，延长生存期等方面 有独特的优势，随着医药科技的发展，中医药治疗肝 癌的临床疗效不断提高，并且也从多方面展开药物 作用机理的'研究。本文开展应用现代临床医疗的彩 超技术评价小鼠肝癌原位移植模型，试图为中医药 临床防治肝癌药物的药效实验研究提供研究手段及 其新的评价方法。本研究也是国家自然基金项目中 药复方靶向给药系统研究的一部分.
材料与方法
1．实验材料小鼠H22肝癌瘤株：中国协和药 物所提供；清洁级ICR／b鼠，雄性，6—8周龄，体质量 18—229：由吉林大学实验动物中心提供，动物合格证 号10—1023；BCN一1 360超净1=作台Jouan公司；KX一41 倒置生物旺微镜，日本OLYMPUS生产；IU22彩超机， Phllips公司.
2．实验方法
2．1小鼠原位肝癌模型的建立及分组取腹腔 接种H22肝癌细胞株后7d的昆明种小鼠。无菌抽取H22 肝癌细胞株腹水，生理盐水洗涤，离一31 000 r／rain，5min 弃上清，台盼蓝染色计数，生理盐水调整癌细胞数至 1×108／ml备用。健康昆明种小鼠，戊巴比妥钠腹腔注 射麻醉，小鼠仰卧固定，备皮，常规消毒铺巾，于上腹正 中剑突下作一约Icm的切口。轻压双侧肋弓以挤出部分肝叶，湿纱布垫于肝叶下方以保护’然后用0．25ml医 用注射器针头沿肝叶长轴方向插人缓慢注入H22肝 癌细胞悬液0．03ml(细胞数为3×106)。在拔出针头的 同时，迅速用棉签轻压lmin止血，然后在针眼周嗣用 酒精棉球轻搽。小心地将肝脏网纳入腹腔，缝合切口， 术毕【lI。术后正常饮水、进食。术后将造模动物随机4 组，即模型3d组，模型5d组，模型9d组，模型16d组， 另设正常对照组。正常组动物同样手术方法给予生 理盐水造模.
2．2彩超对小鼠肝癌造模的检测实验动物分4 次进行B超检测，每次取5只正常组进行对照，分别于 造模第3、5、9、16H将正常对照组和模型组小鼠腹部 剪毛处理，用彩超仪对小鼠肝脏进行扫描，选择最 适宜条件。彩超检测条件：深度：2．0，增益指数74％， 探头频率7．5—12MHz。随后，脱椎处死小鼠，开腹用 游标卡尺测量肿瘤大小，并与彩超结果进行对照.
2．3病理形态学观察剥离肝脏及其肿瘤，10％ 甲醛固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，在光学显 微镜下进行组织学检查.
结果
1．彩超检测与解剖肉眼观察结果正常组小鼠 肝脏彩超检测结果表明：超声显示弱回声，无结节； 正常小鼠解剖肝脏表明：肝脏无结节。模型组小鼠肝 脏超声与解剖检测结果表明：小鼠原位移植肝癌存 在高回声、等回声、低回声3种类型，其中以高回声多 见并较易发现和测量。当肿瘤生长3d时，有50％／b鼠 生长出平均0．2cm×0．14cm大小的结节，此ft,寸B超显 示10只小鼠均无结节；当造模第5天时，有lOO％／Jx鼠 长出平均o．57cmx0．43em大小不等的结节或肿块，并 有1只呈弥漫性生长，彩超仅检查出一只实际大小在 0．29emx0．29em的肿瘤，检出率占总数的10％；当造 模第9天时，有100％／1\"鼠长出平均0．89cmx0．43era， 彩超的检出率可达90％；至第16天时，有100％d、鼠长 出0．89emx0．66em的肿瘤并且小鼠多伴有腹水，此时 彩超的检出率仍为90％。结果见表l、图l.
表1 彩超与解剖观察不问时间小鼠原位移植肝癌情况∞=10) 彩超检查解剖观察造模天数丽面天万可忑夏二了蕊丽看夭不ii忑i再再薄 2．病理学检测结果正常组小鼠肝d,nf清晰， 肝细胞索、肝窦排列整齐，汇管区结构清楚；肝癌模 型组肿瘤细胞生长旺盛，较为弥散，细胞核体积较 大，深染，多呈圆形或椭圆形，胞浆丰富略嗜碱性， 有的胞浆呈空泡状，可见病理性核分裂与瘤巨细胞， 见图1.
讨论
目前，建立小鼠肝癌动物模型方法主要有皮下 移植和肝癌的原位移植，而肝癌的原位移植能够更 好地模仿人肝癌体内的血供和生长环境，提供与肝 癌病人相似的肝癌生物学特性，更好地反映抗癌药 物的药效学指标。但此种方法要求接种手法准确， 对操作环境要求必须无菌，尤其此种模型建立是否 成功常采用动物处死后评价。这是大多数研究者谨 慎采用此方法的原因之。目前，采用小鼠原位肝癌 移植模型进行抗肿瘤药物研究，缺少行之有效的模 型建立评价方法.
彩超是根据形态学的改变为临床诊断疾病提供证据的，它不像病理那样作出准确的诊断，但一些疾 病在超声显像中有特殊表现，并且具有活体、实时、 动态的优点。肝癌的声像图有其规律性，根据这些变 化的规律，目前临床上彩超检查是常用的诊断方法。上常用的彩超机对于实验有使用方便，容易获 得的优点，因此，本实验用临床用彩超机对小鼠原位 移植肝肿瘤模型建立进行评价，探讨用其评价小鼠 原位肝肿瘤的可行性.
实验结果表明：彩超在对小鼠原位肝癌移植模型 建立的初期(0-5天)评价效果并不理想，检出率仅为 10％，但在肿瘤生长成熟期(大于0．57era x 0．43era)对 肿瘤的检出率有了明显的提高，检出率可达到90％.
临床用彩超机在小鼠原位肝癌移植模型的建立过程 中适用于肿瘤成熟期的评价.临床用彩超机探头的常用频率范围为l一15 MHz，最高频率为40 MHz，而用于小动物实验检测的 高频率超声系统探头频率为12．5—82．5MHz，平均中 心频率为40 MHz，本实验发现临床用彩超机探头频 率较低，因此如能够采用高频率的探头将会提高实 验的检出率和准确度.
对小鼠原位肝癌移植模型的评价采用彩超手段 是一种无创诊断和监澳fl／b鼠肝癌原位肿瘤的可行检 测方法，可为中医临床防治肝癌药物实验用小鼠肝 癌原位肿瘤模型建立的判断提供科学依据。此检测 方法也可用于其它实验动物肝癌模型建立的评价.
参考文献
【l】李志字，薛华，何生，等．葡萄球菌肠毒素A脂质体对小鼠原位移 植m2肝癌的治疗作用．中华肝胆外科杂志嬲，10(10阳B，_6％ LI Zhiyu，XUE Hua，HE Sheng，et a1．Antitumor efficacy of staphylococcal enterotoxin A liposomesin vivo．China J Hepatobiliary su玛2004，l()(10)：683-686
【2】农木本．B超诊断肝癌1 12例分析．左江民族医学院学报，1995， 17(1)：46-47
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