影响猪ICSI转基因技术效率的主要因素研究
以猪体外成熟卵子和冷冻解冻的死精子为材料,以pEGFP-N1为模式基因,探讨注射台温度、激活后6-DMAP的处理和精子与PEGFP-N1孵育液添加BSA(牛血清白蛋白)对精子胞质内注射(ICSI)转基因效率的影响.结果表明:注射台温度为30℃时的阳性率为40.07%,而38.5℃时为20.97%,差异极显著(P＜0.01).添加BSA的囊胚转基因率为55.56%,对照组为33.33%,差异极显著(P＜0.01).6-DMAP处理组与对照组的转基因率分别为52.53%和26.25%,差异极显著(P＜0.01);而且6-DMAP处理组的囊胚率(9.96%)显著高于(P＜0.05)对照组(2.30%).研究表明注射台温度对转基因效率有明显影响,温度高转基因率低;精子与PEGFP-N1孵育液添加BSA对转基因胚胎发育有一定促进和保护作用,有利于提高囊胚转基因率;激活后用6-DMAP处理能提高转基因率和囊胚率.
