猪圆环病毒2型核酸疫苗的构建及其免疫效果
[目的]构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因疫苗,并对其免疫效果和安全性进行研究.[方法] 将PCV2 ORF2基因从pMD-ORF2*质粒(包含PCV2 SCH A株ORF2基因)酶切回收,插入到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-ORF2,对该质粒进行酶切和PCR鉴定.将pcDNA-ORF2转染IBRS-2细胞,进行Western blotting检测.将构建好的pcDNA-ORF2制成核酸疫苗,按100 μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠,同时设pcDNA-3.1(+),PCV2全毒和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周.分别于首免后第14天和56天采血,用ELISA法检测抗体;于首免后第56天,采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)对小鼠的细胞免疫进行检测.取首免后56 d小鼠的心肝、脾、肺、肾和脑等实质器官,采用PCR方法检测pcDNA-ORF2核酸疫苗的安全性.[结果] Western blotting结果显示,pcDNA-ORF2构建成功,并在哺乳动物细胞中获得表达.pcDNA-ORF2核酸疫苗能诱导小鼠产生较强的细胞免疫和体液免疫应答.PCV2 ORF2基因未整合到小鼠染色体上.[结论] pcDNA-ORF2可诱导小鼠产生免疫反应,其对小鼠是安全的.
作 者： 王新 郭万柱 周婷 徐志文 王印 王小玉 作者单位： 王新(西北农林科技大学,食品学院,陕西,杨陵,712100)郭万柱,徐志文,王印,王小玉(四川农业大学,动物生物技术中心,四川,雅安,625014)
周婷(西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨陵,712100)
刊 名： 西北农林科技大学学报(自然科学版) ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NORTHWEST A&F UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 2008 36(8) 分类号： S852.65 关键词： 猪圆环病毒2型 ORF2基因 核酸疫苗