人SM22α在巴斯德毕赤酵母中的表达、纯化及抗体制备
目的:用酵母表达重组人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制备兔抗人SM22α多克隆抗体.方法:利用PCR从pGEM3z-SM22α质粒扩增得到人SM22α基因编码区,重组至pPIC9构建酵母表达载体,转染巴斯德毕赤酵母,进行分泌型表达.表达产物经分步盐析和CM-纤维素柱层析纯化后,免疫家兔,制备兔抗人SM22α多克隆抗体.结果:所构建的pPIC9-SM22α酵母表达载体转染酵母感受态细胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色体中,经甲醇诱导84 h,可实现SM22α的高效表达与分泌.用70%硫酸铵处理上清液,收集沉淀进行离子交换层析纯化后,经变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一分子量为22 kD的单一区带.用该纯化产物免疫家兔制备的兔抗人SM22α抗血清可用于检测人或大鼠血管壁中SM22α的表达水平.结论:重组人SM22α可在巴斯德毕赤酵母中进行高效表达与分泌,纯化蛋白可用于抗体制备,为研究SM22α功能提供了检测工具.
作 者： 温进坤 聂磊 李静宜 程云会 韩梅 WEN Jin-kun NIE Lei LI Jing-yi CHENG Yun-hui HAN Mei 作者单位： 河北医科大学基础医学研究所,河北省医学生物技术重点实验室,河北,石家庄,050017 刊 名： 中国应用生理学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(3) 分类号： Q78 关键词： 平滑肌22α 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 抗血清