米曲霉碱性蛋白酶基因的前导区对其在毕赤酵母中表达的必要性
为探讨前导区对米曲霉碱性蛋白酶基因在毕赤酵母中表达的必要性,本试验首先将米曲霉碱性蛋白酶的成熟肽编码基因(alp-m)和表达载体pPIC9K双酶切后连接,得到重组表达载体pPIC9K/alp-m.然后将其线性化后电转化毕赤酵母GS115.筛选阳性转化子进行甲醇诱导表达,并进行SDS-PAGE分析和碱性蛋白酶活力测定,同时在转录水平上对目的基因进行了Northern blot检测.将得到的结果与以前研究中得到的带有前导区的米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母中的表达结果进行对比.结果表明:如果没有前导区,米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母中表达,无论在胞内和胞外均检测不到目的蛋白.由此可见,米曲霉碱性蛋白酶基因在毕赤酵母中表达时必须有前导区的参与.
作 者： 郭继平 马光 马莺 GUO Ji-ping MA Guang MA Ying 作者单位： 郭继平,马莺,GUO Ji-ping,MA Ying(哈尔滨工业大学,食品科学与工程学院,哈尔滨,150086)马光,MA Guang(东北林业大学,生命科学学院,哈尔滨,150040)
刊 名： 上海交通大学学报（农业科学版） ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 2008 26(3) 分类号： Q786 关键词： 米曲霉碱性蛋白酶基因 前导区 毕赤酵母 异源表达