在毕赤酵母中表达人溶菌酶蛋白的研究
将化学合成的人溶茵酶基因舰hLYZ(444 bp)构建到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZ上;载体质粒用Sac I线性化后电击法转化毕赤酵母菌株GS115.在舍Zeocin的抗性培养基筛选后PCR鉴定获得了9株重组菌株.重组菌株经甲醇诱导后取表达上清液进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析.结果显示,重组hLYZ在毕赤酵母中成功表达,在诱导60 h时表达量最高.用镍亲和层析柱纯化重组hLYZ,用Bradford法测得其含量约为324 mg·L-1.比浊法活性测定结果显示所表达的重组人溶茵酶活性达到4473 U.mL-1.本研究利用毕赤酵母分泌型表达载体成功表达了重组人溶菌酶,并探索了简单有效的纯化和活性测定方法,为利用毕赤酵母系统规模化生产重组人溶菌酶奠定了技术基础.
赵凌侠,唐克轩,ZHAO Ling-xia,TANG Ke-xuan(上海交通大学,农业与生物学院,上海,200240)
刊 名： 上海交通大学学报（农业科学版） ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 2008 26(3) 分类号： Q786 关键词： 人溶菌酶 毕赤酵母 生物活性