猪传染性胃肠炎病毒S蛋白在乳酸菌中的表达
目的:构建猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的细胞内表达重组乳酸乳球菌,确定其最佳表达条件,为重组乳酸菌作为口服疫苗防治猪传染性胃肠炎奠定基础.方法:根据猪传染性胃肠炎病毒纤突(S)蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点,设计一对引物,进行PCR,获得含有TGEV S基因4个主要抗原位点的约2000bp目的片段,将其与表达载体质粒pNZ8048进行连接,通过电转化进入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000细胞内,在乳链菌肽(Nisin)的诱导下进行表达,确定最佳表达条件;并通过SDS-PAGE进行检测和Western-blot分析表达蛋白活性.结果:成功获得了TGEV S蛋白在乳酸乳球菌细胞内的表达并且表达的蛋白具有TGE全病毒的抗原性.确定了乳酸乳球菌表达TGEV S蛋白的最佳表达条件为在以1ng/ml的乳链杆菌肽nisin诱导下,诱导后3h,重组蛋白表达效率达最高,重组蛋白约占菌体总蛋白含量的8.7%.结论:在乳酸乳球菌细胞内表达的重组TGEV S蛋白获得了理想表达,为进一步研制开发防治TGE口服疫苗提供物质基础.
作 者： 唐丽杰 欧笛 王荣军 徐义刚 钟涛 李一经 TANG Li-jie OU Di WANG Rong-jun XU Yi-gang ZHONG Tao LI Yi-jing 作者单位： 东北农业大学,黑龙江,哈尔滨,150030 刊 名： 生物技术 PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2007 17(6) 分类号： Q933 关键词： TGEV S蛋白 乳酸菌 表达及分析