HIV-1整合酶蛋白的可溶性表达及功能研究

HIV-1整合酶蛋白的可溶性表达及功能研究

HIV-1整合酶是HIV病毒复制中一个重要的酶,也是治疗艾滋病药物的一个重要靶点.为了开展以整合酶蛋白为靶点的抑制剂筛选,构建HIV-1整合酶重组质粒,在原核细胞中进行可溶性表达和功能研究.通过重叠PCR技术引入F185K和C280S突变于HIV-1 B亚型标准株的整合酶cDNA片段中,PCR扩增片段克隆到pET-28a(+)表达载体中,构建重组质粒,在E coli中进行整合酶基因表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,亲和层析纯化蛋白,酶联免疫吸附实验方法测定整合酶的生物学活性.结果构建的重组质粒获得高效稳定的可溶性表达,ELISA实验证实该蛋白具有整合酶的3'切割DNA和5'链转移的活性.HIV-1整合酶蛋白的可溶性表达和活性研究为建立以整合酶为靶点的抗HIV药物筛选平台打下了基础.

作 者： 程绍辉 马晓慧 何红秋 刘斌 陈慰祖 王存新 CHENG Shao-hui MA Xiao-hui HE Hong-qiu LIU Bin CHEN Wei-zu WANG Cun-xin   作者单位： 北京工业大学生命科学与生物工程学院,北京,100022  刊 名： 中国生物工程杂志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(1)  分类号： Q786  关键词： HIV-1   整合酶   克隆   表达   ELISA