帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备
目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体.方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白.融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测.结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCPcD-NA序列为420bp.SDS-PAGE和Western blot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45000.以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应.结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达.用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
作 者： 黄银霞 韩俊 张晓光 姚海兰 王小凡 张瑾 张宝云 董小平 作者单位： 中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,100052 刊 名： 中国老年学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY 年，卷(期)： 2006 26(2) 分类号： Q42 Q786 关键词： α-共核蛋白 神经退行性变 原核表达 抗体制备