重组幽门螺杆菌AhpC基因的克隆表达及其初步纯化
目的克隆表达幽门螺杆菌(helicobacter pylori)AhpC基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌的疫苗保护性抗原奠定基础.方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出AhpC基因片段,将目的基因插入表达载体pET-11c中,重组载体pET-AhpC经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用阴离子交换层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR扩增的AhpC基因长度为597bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达98%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的28.7%,经纯化后,蛋白纯度达70%以上.Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应.结论成功构建了AhpC表达载体pET-AhpC,并在大肠杆菌中高效表达.
作 者： 张卫军 邹全明 毛旭虎 罗萍 解庆华 作者单位： 第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038 刊 名： 重庆医学 ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE 年，卷(期)： 2006 35(11) 分类号： Q78 关键词： 幽门螺杆菌 AhpC基因 克隆