分析谷胱甘肽-S-转硫酶的产物抑制反应过程测定还原型谷胱甘肽

分析谷胱甘肽-S-转硫酶的产物抑制反应过程测定还原型谷胱甘肽

目的以谷胱甘肽-S-转硫酶(GST)为模型,探讨有产物抑制时用积分法分析酶反应过程测定底物量的可靠性.方法从猪肝制备GST.1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)终浓度为1.0 mmol/L,监测GST催化还原型谷胱甘肽(GSH)与CDNB结合产物在340 nm吸收变化.用积分法预测反应终点的产物吸收.结果优化产物抑制常数可使此积分法所得反应终点产物吸收对剩余底物变化不敏感.此积分法测定GSH对常见干扰有抗性.此法测定大鼠肝匀浆中外加GSH回收率大于98%,线性响应上限接近90μmol/L,下限接近2.0μmol/L,所得大鼠肝GSH含量与文献报道一致.结论有产物抑制时用积分法也可定量底物;用此积分法进行动力学酶法分析具有一定普遍性,而且有明显优势.

作 者： 赵利娜 陶佳 赵运胜 廖飞 Zhao Lina Tao Jia Zhao Yunsheng Liao Fei   作者单位： 赵利娜,陶佳,赵运胜,Zhao Lina,Tao Jia,Zhao Yunsheng(重庆医科大学生物信息学与分子工程研究室,重庆,400016)

廖飞,Liao Fei(重庆医科大学生物信息学与分子工程研究室,重庆,400016;重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室,重庆,400016) 

刊 名： 西安交通大学学报（医学版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 27(3)  分类号： Q555.8  关键词： 积分法   动力学酶法分析   还原型谷胱甘肽   谷胱甘肽-S-转硫酶   1-氯-2,4-二硝基苯  

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