SUMO-1小干扰RNA的构建及其干扰效果检测
目的:构建小泛素相关修饰物-1(SUMO-1)基因的小干扰RNA(siRNA),并检测其对SUMO-1基因表达的干扰效果.方法:根据SUMO-1基因序列设计一条合理的SUMO-1 siRNA,并将其克隆到pSliencer2.1-U6 neo载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行酶切和测序鉴定;将构建的SUMO-1 siRNA重组质粒单独转染或与带HA标签的SUMO-1表达载体共同转染人胚肾293T细胞,收集细胞裂解物,以抗HA和SUMO-1的抗体用Westem印迹检测siRNA的干扰效果.结果:构建了SUMO-1 siRNA重组质粒,干扰效果可达80%以上.结论:构建的SUMO-1 siRNA为进一步进行蛋白质SUMO-1化修饰的研究奠定了基础.
作 者： 任雯 韦玮 叶棋浓 REN Wen WEI Wei YE Qi-Nong 作者单位： 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850 刊 名： 生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分类号： Q78 关键词： SUMO化 SUMO-1 小干扰RNA 表达载体