人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选
目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1.用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性.结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰,IBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台.
作 者： 孙静 魏从文 管楷 程孝中 徐扬 袁媛 尹晴晴 宋婷 郑子瑞 张艳红 钟辉 SUN Jing WEI Cong-Wen GUAN Kai CHENG Xiao-Zhong XU Yang YUAN Yuan YIN Qing-Qing SONG Ting ZHENG Zi-Rui ZHANG Yan-Hong ZHONG Hui 作者单位： 孙静,SUN Jing(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;北京市公安医院,北京,100121)魏从文,宋婷,张艳红,钟辉,WEI Cong-Wen,SONG Ting,ZHANG Yan-Hong,ZHONG Hui(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850)
管楷,程孝中,袁媛,尹晴晴,GUAN Kai,CHENG Xiao-Zhong,YUAN Yuan,YIN Qing-Qing(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;安徽大学,生命科学院,安徽,合肥,230039)
徐扬,郑子瑞,XU Yang,ZHENG Zi-Rui(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;吉林大学,分子酶学工程实验室,吉林,长春,130012)
刊 名： 生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分类号： Q78 关键词： TANK结合激酶1 小干扰RNA 萤光素酶试验 转录活性