杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定
目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NRcDNA全长序列,分析其突变位点.方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库.然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库.再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群.用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株.然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性.②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NR cDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NR eDNA序列比较,分析其突变位点.结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变.它们均在近3'端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变.此外,2株还分别由于在1 235和1 639的位点突变而产生了一个终止密码子.结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株.
作 者： 李慎柯 贾岩龙 刘红涛 李杰 鲁照明 王建民 薛乐勋 LI Shenke JIA Yanlong LIU Hongtao LI Jie LU Zhaoming WANG Jianmin XUE Lexun 作者单位： 郑州大学细胞生物学研究室,郑州大学第一附属医院临床医学重点学科开放实验室,郑州,450052 刊 名： 郑州大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 41(3) 分类号： Q754 关键词： 杜氏盐藻 硝酸盐还原酶 突变株