杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析
目的: 克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析.方法: 利用BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstⅠ、SalⅠ、Xbal 6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库.采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析.为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的表达.结果: 从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列.GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性.结论: 所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有"开关"活性的可控性启动子.
作 者： 李杰 贾岩龙 闫红霞 潘卫东 薛乐勋 LI Jie JIA Yan-long YAN Hong-xia PAN Wei-dong XUE Le-xun 作者单位： 郑州大学细胞生物学研究室,郑州大学第一附属医院,郑州,450052 刊 名： 中国生物工程杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 26(11) 分类号： Q94 关键词： 杜氏盐藻 硝酸盐还原酶基因 5′上游序列 功能