日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化
以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为:在25 μL反应体系中,10×Buffer 2.5μL,DNA模板200～300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,引物0.4 μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95℃预变性5 min;接着35个循环包括95℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunit I,COI),NADH脱氢酶亚基V(NADH dehydrogenase subunit 5,ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.
作 者： 赵晓勤 倪娟 陈立侨 顾志敏 周志明 ZHAO Xiao-qin NI Juan CHEN Li-qiao GU Zhi-min ZHOU Zhi-ming 作者单位： 赵晓勤,倪娟,陈立侨,ZHAO Xiao-qin,NI Juan,CHEN Li-qiao(华东师范大学,生命科学学院,上海,200062)顾志敏,周志明,GU Zhi-min,ZHOU Zhi-ming(浙江省淡水水产研究所,浙江,313001)
刊 名： 华东师范大学学报（自然科学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF EAST CHINA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 2006 ""(2) 分类号： Q503 关键词： 日本沼虾 PCR 优化