低氧反应元件调控下h-VEGF165基因表达及其蛋白产物的延迟消失
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用.为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element,HRE)作为调控开关,研究氧环境对VEGF基因mRNA及蛋白产物表达的影响.重组腺相关病毒(recombinant adeno-associ-ated virus,rAAV)作为载体(rAAV-HRE-h-VEGF165),转染离体培养大鼠心肌细胞,在常氧/缺氧(氧浓度1%)/缺氧复氧条件下进行培养,用酶联免疫特异性测定(enzymelinkedimmunosorbent assay,ELISA)方法检测培养液h-VEGF165蛋白浓度,细胞免疫荧光染色观测细胞内h-VEGF165蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测细胞h-VEGF165 mRNA表达.结果显示:未转染组、常氧培养组均无h-VEGF165mRNA及其蛋白表达;缺氧培养组h-VEGF165mRNA及蛋白均表达;缺氧复氧4 h组的h-VEGF165mRNA消失,培养液中h-VEGF165蛋白减少,细胞内h-VEGF165蛋白存在;缺氧复氧8 h及12 h组的h-VEGF165mRNA消失,培养液和细胞内h-VEGF165蛋白均消失.研究表明,在HRE调控下,缺氧可促使h-VEGF165基因表达,复氧后,h-VEGF165mRNA表达停止,蛋白产物延迟消失.
作 者： 张宜乾 张中明 闫英群 董红燕 ZHANG Yi-Qian ZHANG Zhong-Ming YAN Ying-Qun DONG Hong-Yan 作者单位： 张宜乾,张中明,闫英群,ZHANG Yi-Qian,ZHANG Zhong-Ming,YAN Ying-Qun(徐州医学院附属医院胸心外科)董红燕,DONG Hong-Yan(徐州医学院神经生物研究中心,徐州,221002)
刊 名： 生理学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA PHYSIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 58(3) 分类号： Q5 关键词： 血管内皮生长因子 低氧反应元件 心肌细胞