体外诱导鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的实验研究
目的:探讨小鼠胚胎干细胞(ESCs)在转化生长因子-β1(TGF-β1)联合内脏内胚层END-2细胞共培养诱导条件下分化为心肌细胞的特征.方法:小鼠胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上增殖培养,先将ESCs悬浮培养形成2-3 d的拟胚体(EBs ),再将2-3 d EBs种植到含有TGF-β1的24孔板中进行诱导,以及种植到铺有END-2细胞饲养层的24孔板中进行诱导,培养液中同时加入TGF-β1. 免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(α-Actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构.流式细胞仪检测EBs集落心肌细胞的平均分化率.结果:TGF-β1诱导组和TGF-β1联合内脏内胚层END-2细胞共培养诱导组分别有43%,91%(P＜0.05)的拟胚体出现自发节律性收缩,均表达心肌细胞特异性蛋白α-Actin和TnT,以及观察到心肌样超微结构,但在共培养的条件下,自发节律性收缩区域较大,且细胞形态较单一.两诱导组EBs集落心肌细胞平均分化率分别是35%,74%(P＜0.05).结论:TGF-β1联合内脏内胚层END-2细胞共培养对小鼠ESCs向心肌细胞定向分化有协同作用,具有较高的诱导分化率.
