应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究
目的 应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白.方法 用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析.结果 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白.初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用.结论 应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白.
成军,郭江,CHENG Jun,GUO Jiang(北京地坛医院传染病研究所)
郭风劲,GUO Feng-jin(重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室)
刊 名： 中华实验和临床病毒学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY 年，卷(期)： 2006 20(4) 分类号： Q5 关键词： 酵母菌 杂交 干扰素β 结合蛋白