呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建
用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coli DH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆.挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含sphingomonas sp.CDS-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒.将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonas sp.CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高.对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显.通过Not Ⅰ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA.以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA.该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究Sphingomonas sp.CDS-1的生态学行为奠定了基础.
作 者： 徐剑宏 武俊 洪青 张志琳 李顺鹏 王云端 XU Jian-hong WU Jun HONG Qing ZHANG Zhi-lin LI Shun-peng WANG Yun-duan 作者单位： 南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,210095 刊 名： 微生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 46(4) 分类号： Q78 关键词： Sphingomonas sp.CDS-1 呋喃丹 降解 双标记 基因工程菌