难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序.方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序.结果 AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp.结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列.
作 者： 李明 申晓冬 丛延广 谭银玲 饶贤才 胡福泉 LI Ming SHEN Xiao-dong CONG Yan-guang TAN Yin-ling RAO Xian-cai HU Fu-quan 作者单位： 第三军医大学基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038 刊 名： 第三军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 2006 28(6) 分类号： Q75 Q785 Q939.48 关键词： 大片段克隆 噬菌体 基因组测序