实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用
目的:建立一种快速、定量、特异、灵敏的PCR方法用于对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的早期诊断和疫情监测.方法:根据GenBank登录的IHHNV毒株序列,使用生物学软件进行序列比对,在IHHNV保守区序列设计特异性引物与Taqman探针.对实时荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性、灵敏度、重复性,并与普通PCR进行盲样测试的比对.结果:本法线性范围5×102～5×107拷贝/ml,检出限5×101拷贝/ml,灵敏度超过普通PCR100倍,特异性高于普通PCR,重复性极好(S=0.035～0.39,CV=0.13%～1.05%),检测时间为普通PCR的1/5,现场盲样IHHNV检出阳性率高于普通PCR 26.00%.结论:本研究建立Taqman实时荧光定量PCR用于对虾IHHNV检测具有特异、灵敏、快速、定量、重复性好等优点.
作 者： 王忠发 王建跃 卢亦愚 何伟贤 王学海 Wang Zhong-fa Wang Jian-yue Lu Yi-yu He Wei-xian Wang Xue-hai 作者单位： 王忠发,王建跃,何伟贤,Wang Zhong-fa,Wang Jian-yue,He Wei-xian(浙江省舟山市疾病预防控制中心,浙江舟山,316000)卢亦愚,Lu Yi-yu(浙江省疾病预防控制中心,杭州,310009)
王学海,Wang Xue-hai(浙江大学医学院病原生物研究所,杭州,310031)
刊 名： 中国卫生检验杂志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)： 2007 17(9) 分类号： Q75 关键词： 实时荧光定量PCR IHHNV 病毒载量