重组人骨形态发生蛋白2在CHO细胞中的表达、鉴定及活性分析
构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mL G418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量.收集的rhBMP-2蛋白进行Western blot检测,还原蛋白样品电泳产生一条大小约为18kD的特异性条带,非还原蛋白样品电泳产生一条大小约为30kD的特异性条带,提示表达的rhBMP-2是经过糖基化修饰的,且以同源二聚体形式分泌表达.单细胞分离培养得到14株rCHO(hBMP-2)单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-2表达水平,最高可达7.83μg/24h/106cells.活性分析结果表明,表达的rhBMP-2具有很强的生物学活性.
作 者： 张道永 杨爽 吕树军 闫继东 朱天慧 ZHANG Dao-Yong YANG Shuang L(U) Shu-Jun YAN Ji-Dong ZHU Tian-Hui 作者单位： 张道永,杨爽,吕树军,闫继东,ZHANG Dao-Yong,YANG Shuang,L(U) Shu-Jun,YAN Ji-Dong(南开大学医学院分子遗传学实验室,天津,300071)朱天慧,ZHU Tian-Hui(南开大学医学院分子遗传学实验室,天津,300071;南开大学生物活性材料教育部重点实验室,天津,300071)
刊 名： 生物工程学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(6) 分类号： Q786 关键词： 人骨形态发生蛋白2 CHO 共转染 C2C12 碱性磷酸酶