重组羧肽酶B及其包涵体溶解性的研究
目的 构建重组羧肽酶B(rCPB)的表达质粒和表达菌株,表达羧肽酶B(CPB),并对表达CPB包涵体的溶解性进行研究.方法 构建CPB重组质粒pET-21a-CPB,将其导入表达菌株BL21(DE3)中,分别在25℃和37℃进行诱导表达;所得包涵体分别用不同浓度尿素添加不同还原剂溶解,以溶液中的蛋白质浓度判定其溶解性,利用非还原SDS-PAGE分析其溶解性提高的原因.结果 诱导后生长温度不同对rCPB包涵体的纯度及后期处理均有影响;rCPB包涵体在10 mol/L尿素溶液中的溶解度比在8 mol/L尿素溶液中提高2～3倍;添加0.75%β-巯基乙醇能显著改善rCPB包涵体的溶解效果.经非还原SDS-PAGE分析,添加β-巯基乙醇后,溶解rCPB聚体的含量减少.结论 成功地表达了rCPB,并通过实验提高了rCPB包涵体的溶解度.
